色譜柱和更小粒徑的優(yōu)勢(shì)之一是可以在很高的線性速度操作,不會(huì)損失系統(tǒng)柱效。分析過程可以通過增加流速加快,在通常應(yīng)用時(shí),可以加快分析過程,同上保證高分辨率。根據(jù)沃特世色譜柱的要求設(shè)計(jì),于濕法填充沃特世色譜柱,工作壓力可達(dá)25,000psi;可用于分析型、半制備、制備型沃特世
色譜柱的勻漿裝柱;壓力與流量均線性可調(diào),可根據(jù)各種尺寸柱及粒徑填料的需求調(diào)節(jié);
高壓泵接液部分與驅(qū)動(dòng)部分隔離,有效防止外界雜質(zhì)進(jìn)入高壓腔影響裝柱質(zhì)量;系統(tǒng)所用閥、高壓管、接頭等元件均為*,按相應(yīng)的壓力等級(jí)選型,材質(zhì)為316不銹鋼,確保裝柱質(zhì)量及安全;包含支架方便沃特世色譜柱固定;根據(jù)不同的沃特世色譜柱和流動(dòng)相請(qǐng)選用相應(yīng)規(guī)格的裝柱系統(tǒng)以保證更佳柱效;換裝不同的流動(dòng)相前請(qǐng)用足量的頂替液清洗;流動(dòng)相中所使用的各種溶劑要盡可能使用色譜純,配流動(dòng)相的水是超純水,建議使用0.45 μm濾膜過濾流動(dòng)相,除去微粒雜質(zhì);可跟據(jù)客戶要求配備各種規(guī)格的勻漿管和連接接頭。
在日常分離分析工作中,反相液相色譜柱的正確使用和維護(hù)十分重要,色譜柱使用是否得當(dāng),直接影響色譜柱的壽命,稍有不慎就會(huì)降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中,需要注意下列問題,以維護(hù)色譜柱。
柱子在裝卸、更換時(shí),動(dòng)作要輕,接頭擰緊要適度。必須防止較強(qiáng)的機(jī)械振動(dòng),以免柱床產(chǎn)生空隙。如果儀器用來做常規(guī)分析,樣品種類有限,但分析次數(shù)多,則不妨為每一類常規(guī)分析配置一根柱,這樣有助于延長(zhǎng)柱子的壽命。避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會(huì)影響柱內(nèi)的填充狀況;柱壓的突然升高或降低也會(huì)沖動(dòng)柱內(nèi)填料,因此在調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)該緩慢進(jìn)行,在閥進(jìn)樣時(shí)閥的轉(zhuǎn)動(dòng)不能過緩。
應(yīng)逐漸改變?nèi)軇┑慕M成,特別是反相色譜中,不應(yīng)直接從有機(jī)溶劑改變?yōu)槿渴撬?,反之亦然。如使用柱溫控制裝置時(shí),應(yīng)注意在通人流動(dòng)相后才能升溫。一般說來反相液相色譜柱不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。否則反沖會(huì)迅速降低柱效。選擇使用適宜的流動(dòng)相,以避免固定相被破壞。有時(shí)可以在進(jìn)樣器前面連接一個(gè)預(yù)柱,分析柱是鍵合硅膠時(shí),預(yù)柱為硅膠,可使流動(dòng)相在進(jìn)入分析柱之前預(yù)先被硅膠“飽和”,避免分析柱中的硅膠基質(zhì)被溶解。避免將基質(zhì)復(fù)雜的樣品尤其是生物樣品直接注人柱內(nèi),需要對(duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理或者在進(jìn)樣器和色譜柱之間連接一個(gè)保護(hù)柱。保護(hù)柱一般是填有相似固定相的短柱。保護(hù)柱可以而且應(yīng)該經(jīng)常更換。
經(jīng)常用強(qiáng)溶劑沖洗色譜柱,清除保留在柱內(nèi)的雜質(zhì)。在進(jìn)行清洗時(shí),對(duì)流路系統(tǒng)中流動(dòng)相的置換應(yīng)以相混溶的溶劑逐漸過渡,每種流動(dòng)相的體積應(yīng)是柱體積的20倍左右,即常規(guī)分析需要50-75mL。保存色譜柱時(shí)應(yīng)將柱內(nèi)充滿乙腈或甲醇,柱接頭要擰緊,防止溶劑揮發(fā)干燥。禁止將緩沖溶液留在柱內(nèi)靜置過夜或更長(zhǎng)時(shí)間。反相液相色譜柱使用過程中,如果壓力升高,一種可能是燒結(jié)濾片被堵塞,這時(shí)應(yīng)更換濾片或?qū)⑵淙〕鲞M(jìn)行清洗;另一種可能是大分子進(jìn)人柱內(nèi),使柱頭被污染;如果柱效降低或色譜峰變形,則可能柱頭出現(xiàn)塌陷,死體積增大。安捷倫色譜柱在完成分離分析工作之后,不應(yīng)立即停機(jī),需及時(shí)對(duì)色譜分析系統(tǒng)進(jìn)行沖洗,一般0.5h以上,以除去色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)。